در قالب word و در 53 صفحه، قابل ویرایش.
-1:انتخاب نمونه:
نمونه‌ها شامل, كنه نروماده, تخم و لاروآن، كه متعلق به سه منطقه بوشهر، كردان كرج و بوئين زهرا (گوشه گويي و عصمت آباد) بودند، از بخش تك ياخته شناسي آزمايشگاه تحقيقات بندپايان مؤسسه سرم سازي رازي و همچنين طي مطالعات شخصي خود در بوئين زهرا تهيه شده بودند.
نمونه‌هاي كنه در قالب سه گروه كه از هر گروه (منطقه) تعدادي نمونه براي استخراج DNA در نظر گرفته شدند، علاوه بر آن تعدادي از نمونه‌ها نيز به منظور حفظ كيفيت و علي‌الخصوص براي جلوگيري از تبديل تخم كنه كه در دماي اتاق صورت مي‌گيرد، در دماي 5 درجه سانتيگراد در يخچال نگهداري شدند.
4-2: استخراج DNA ژنومي و ارزيابي كيفيت آن:
4-2-1: پودر نمونه‌ها:
بعد از تهيه كنه ها، به ميزان 15 تا 20 ميلي گرم از تخم كنه هيالوما آناتوليكم آناتوليكم كه در داخل تانك حاوي ازت مايع و با استفاده از ميله پلاستيكي استريل نمونه كاملاً پودر شدند. با توجه به روشهاي مختلف استخراج DNA (به بخش (1) در جدول شماره ( 1-7) رجوع شود)
در مورد كنه هيالوما روش فنل كلروفرم به همراه پروتئينازK (d’oliveriaetali; 1997) و روش استخراج به كمك جذب برروي فيبر شيشه (كيت) انتخاب گرديد.
2-2-2- استخراج DNA به روش فنل – كلروفرم به هماره پروتئيناز K:
در بررسي روشهاي جداسازي و خالص سازي DNA ژنومي بهترين كيفيت DNA در استخراج با فنل – كلروفرم – ايزوآميل الكل به دست آمد و بر روي ژل آگارز حداقل اسمير مشاهده گرديد. (شكل شماره 3-1)
3-2-2- استخراج DNA به كمك جذب بر روي فيبر شيشه (كيت):
در روش استخراج بر روي فيبر شيشه متصل گرديده و پس با شستشو خارج گرديد. (شكل شماره3- 1) در اين روش عليرغم داشتن راندمان بالاتر ميزان اسمير مشاهده شده در DNA ژنومي بيشتر بود.
پس از تعيين غلظت DNA استخراج شده از آن جهت آزمايش PCR مورد بررسي قرار گرفت.